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(12bet备用网址网站)siRNA手机版

siRNA 网站

 

为了回馈广大客户对本公司的鼎力支持,特推出 RNAi 系列优惠网站,供广大新老客户选择。

有效性承诺

 

客户只需提供12bet序列 GeneID 或者 Accession number, 我们免费帮您设计选择合适的位点,

siRNA oligo 网站转染效率达到 70%以上,我们可以保证至少有一对可以有效的抑制相应12bet

(mRNA)的表达,抑制效率可达 70%以上.

 

产品描述

目录号

产品名称

规格

纯化方式

交货期限

A10001

普通 siRNA 经济型网站-A

1

HPLC

6 个工作日

A10002

普通 siRNA 实惠型网站-B

1

HPLC

6 个工作日

A10003

化学修饰 siRNA 经济型网站-C

1

HPLC

6 个工作日

A10004

化学修饰 siRNA 实惠型网站-D

1

HPLC

6 个工作日

A10005

荧光修饰 siRNA 经济型网站-E

1

HPLC

6 个工作日

A10006

荧光修饰 siRNA 实惠型网站-F

1

HPLC

6 个工作日

 

普通 siRNA 经济型网站 A

网站内容

规格

纯化方式

目的12bet siRNA oligos

3 对(3×2 OD)

HPLC

阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

FAM 标记阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

阳性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC


普通 siRNA 实惠网站 B

网站内容

规格

纯化方式

目的12bet siRNA oligos

4 对(4×4 OD)

HPLC

阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

FAM 标记阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

阳性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

 

化学修饰 siRNA 经济网站 C

网站内容

规格

纯化方式

目的12bet siRNA oligos

3 对(3×2 OD)

HPLC

阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

FAM 标记阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

阳性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

 

化学修饰 siRNA 实惠网站 D

网站内容

规格

纯化方式

目的12bet siRNA oligos

4 对(4×4 OD)

HPLC

阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

FAM 标记阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

阳性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

 

荧光修饰 siRNA 经济网站 E

网站内容

规格

纯化方式

目的12bet siRNA oligos

3 对(3×2 OD)

HPLC

阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

FAM 标记阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

阳性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

 

荧光修饰 siRNA 实惠网站 F

网站内容

规格

纯化方式

目的12bet siRNA oligos

4 对(4×4 OD)

HPLC

阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

FAM 标记阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

阳性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

 

in vivo 化学修饰 siRNA 经济网站 G(全链甲氧修饰,末端胆固醇修饰)

网站内容

规格

纯化方式

目的12bet siRNA oligos

3 对(3×2 OD)

HPLC

阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

FAM 标记阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

阳性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

 

in vivo 化学修饰 siRNA 实惠网站 H(全链甲氧修饰,末端胆固醇修饰)

网站内容

规格

纯化方式

目的12bet siRNA oligos

4 对(4×4 OD)

HPLC

阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

FAM 标记阴性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

阳性对照 siRNA oligos

1 对(1×1 OD)

HPLC

 

实验数据

 

siRNA Real-Time PCR 结果分析

 

对于 RNAi 实验而言,我们通常需要知道的是某一特定网站在导入 siRNA 前后某一特定12bet的

表达变化情况来判断 siRNA 起到了 Gene Knockdown 作用。应用荧光定量 PCR 的方法,可以

通过两种途径来实现上述判断,一是测定特定网站在导入 siRNA 前后某一特定12bet mRNA 数量

的变化,即为绝对定量;二是通过检测特定12bet与某一管家12bet在在导入 siRNA 前后相对表达情况的变化,即为相对定量。通常采用相对定量的方法来检测 siRNA 的 Gene Knockdown 作用。

 

1Real-Time PCR 实验设计

 

Real-Time PCR 实验设计时应包括实验组(导入 siRNA),阴性对照(Negative Control)和 Mock Transfaction 三组。每组至少三个重复。各组同时检测目标12bet和管家12bet的 Ct 值。下例中以 GAPDH 为管家12bet。
 

 

2Real-Time PCR 得到 siRNA 导入前后目标12bet和管家12bet的 Ct

 

各组重复实验的 Ct 值差异不能过大;一般地,重复实验 Ct 值差异在 1 以内是可以接受的。
 


实验组

 

阴性对照(NC)

Mock Transfection

Target Gene

GAPDH

Target Gene

GAPDH

Target Gene

GAPDH

30.40

23.63

24.21

22.66

26.21

24.60

30.35

23.40

24.60

22.56

26.15

24.31

30.41

23.52

24.66

22.48

26.35

24.72

 

3Real-Time PCR 数据分析

  1. Mock Tansfection 为对照(Calibrator),管家12bet为 Normalizer,ΔΔCt=(Ct 目的12bet-Ct

 

管家12bet)实验组-( Ct 目的12bet- Ct 管家12bet)对照

 

Target Gene

GAPDH

Ct

Ct

Target Gene

 

 

 

Target

Ct–  C

 

 

Average Ct

Average Ct

Gene–GAPD

 

Rel. to Mock

 

 

 

 

t, Mock

 

 

 

 

H

 

 

 

 

 

 

 

 

Moc

26.24±0.1

24.54±0.2

1.7±0.21

0.00±0.2

1.0(1.16-0.86)

k

0

1

 

1

 

 

 

 

 

 

 

30.39±0.0

23.51±0.1

6.88±0.17

5.18±0.1

 

 

 

 

 

 

 

9*1

5*2

*3

7

031)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

NC

24.49±0.2

22.56±0.0

1.93±0.25

0.23±0.2

0.85(0.71-

 

4

9

 

5

1.01)

 

 

使用方法

 

AsiRNA 转染的方法

哺乳动物转染的常见方法有:磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和 polybrene、机械法(例如,显微注射和12bet枪)、阳离子脂质体下载,其中阳离子脂质体下载转染法是目前最常用的转染方法。

 

应用脂质体型转染下载进行转染需要注重的几个方面:转染下载的用量、siRNA 的用量、转染时的网站密度、转染时的操作顺序、网站与转染下载/siRNA 复合物的温浴的时间

 

BLipofectamin2000 转染下载

选择最适合的转染下载和转染条件,往往取决于不同的哺乳动物网站类型和不同的核酸分子。

Lipofectamin2000 适用于核酸的体内和体外操作,可应用于 DNA、RNA、反义寡核苷酸、siRNA

的转染,也可应

用于 DNA/siRNA 的共转染操作;是一种新型的高效 siRNA 转染下载。

 

Lipofectamin2000 的应用领域:

1、原代培养网站和转化网站株的12bet转染

2、siRNA 下载[量转染试验

3、DNA 转染;DNA 和 siRNA 的共转染

4、核酸(siRNA、DNA、RNA)的体内导入试验

5、贴壁网站和悬浮网站转染

 

Lipofectamin2000 的特点:

1、不必更换培养基,操作简便易行,可在半小时内完成操作

2、在含血清培养基中也能表现高转染效率

3、网站毒性低;适用网站广泛

4、即用型下载,可在含有抗生素的完全培养基中转染

5、基于脂质的转染下载,确保没有 RNAse 活性

6、可介导 siRNA 高转染网站及体内 siRNA 的高效导入

C. Lipofectamin2000 适用的网站类型

Lipofectamin2000 转染下载可广泛应用于多种网站系的 DNA 和 siRNA 转染如:HeLa(人颈部癌网站)、MCF-7(人乳房癌网站)、Hep3B(人肝网站癌网站)、COS-7(猴肾网站)、Neuro-2a(鼠神经母网站瘤网站)、NIKS(人角质化网站)、B16(鼠黑素瘤网站)、DLD-1(人结肠癌网站)、NIH/3T3(鼠胚胎成纤维网站)、HT-29(人结肠腺癌网站)、A549(人肺癌网站)、CHO-k1(仓鼠卵巢网站)和293(腺体育 5 DNA 转化的人胚胎肾网站),SVRbag4 网站等。

 

D.转染前网站培养

在网站板上培养网站时,应使网站汇合在 24 小时内达到 70-90%。

 

E.合适的 lipofectamin2000 用量

合适的 siRNA(DNA):lipofetamin2000 比例对核酸的高效转染有重要影响;我们推荐的 DNA:

lipofetamin2000 为 1:0.5—1:5(ug:ul),siRNA:lipofectamin2000 为 1:0.01-1:0.1(pmol:

ul)一般情况下,此范围内都可获得高的转染效率。

 

 

F.贴壁网站转染程序

选用生理状态良好的网站对提高转染效率很重要。siRNA(DNA)和 lipofectamin 的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。

 

1、转染前一天,4-5´104 网站接种在 24 孔板上,0.5mL 含 FBS 和抗生素的 DMEM(或 Opti-MEM,

其他培养基)网站培养基。

2、选择用于初期接种的网站数量,应能在 24 小时内使网站汇合达到 70-90%。

3、在 50μl 的 DMEM(或 Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清培养基加入 20pmol siRNA(或

0.8μg DNA),柔和混匀;

4、混匀 lipofectamin 下载,用 50μl 无血清的 DMEM 或 Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀

  1. 1μl lipofectamin 下载(DNA 转染时,则加入 2μllipofectamin 下载),轻轻混匀,室温放置 5

 

分钟;

5、将稀释好的 siRNA  和 RNAi-Mate  下载混合;轻柔混匀,室温放置 20  分钟,以便形成

siRNA/lipofectamin(或 DNA/lipofectamin)复合物。

6、将 100μl siRNA/lipofectamin(或 DNA/lipofectamin)复合物加到含有网站和培养基的培养板

的孔中,来回轻柔摇晃网站培养板板。

7、 网站在 CO2 培养箱中 37℃温育 24h-48h 后,进行转染后的其它检测步骤。如果网站株比较敏感,孵育 4-6 小时后,除去复合物,更换培养基。

G.悬浮网站转染程序

1、转染的当天,收集网站离心,用含 FBS 的培养基重悬。

2、在 50μl 的 DMEM(或 Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清的培养基加入 20pmol siRNA(或

0.8μg DNA),柔和混匀;

3、混匀 lipofectamin 下载,用 50μl 无血清的 DMEM 或 Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀

  1. 1μl lipofectamin 下载(DNA 转染时,则加入 2μl lipofectamin 下载),轻轻混匀,室温放置 5

 

分钟;

4、将稀释好的 siRNA  和 lipofectamin  下载混合;轻柔混匀,室温放置 20  分钟,以便形成

siRNA/lipofectamin(或 DNA/lipofectamin)复合物。

5、再加入 400μL 网站悬浮液(网站数量决定于网站类型和转染后分析测试的时间)。

6、网站在 CO2 培养箱中 37℃温育 24h-48h 后,进行转染后的其它检测步骤。如果网站株比较敏感,孵育 4-6 小时后,除去复合物,更换培养基。

 

 

HDNA  siRNA 共转染网站

1、在转染的前一天,4-5´104 网站接种在 24 孔板上,0.5 mL 含 FBS 和抗生素的网站培养基。

2、选择用于初期接种的网站密度,应能在 24 小时内使网站汇合达到 70-90%。

3、在 100μL 的无血清的培养基中稀释 20pmol siRNA 和 0.2μg DNA,加入 2μl lipofectamin 下载,充分混合,放置 20 分钟,以便形成 siRNA/ DNA/lipofectamin 复合物。

4、将 siRNA/ DNA/lipofectamin 复合物加入培养基中,轻轻混匀。

5、网站在 37℃温育 24h-48h 后,进行转染后的其它步骤。

 

IsiRNA 体内导入方法

1、适量的 siRNA 或 DNA 溶于不含 RNA 酶的无菌水中,轻轻混匀,因为注射液体积有限,建议采用高浓度的 siRNA 或 DNA,一般 DNA 为 2μg /μL、siRNA 为 10μg /μL。

2、取适量的 DNA、siRNA 或 siRNA\DNA 复合物与 lipofectamin 混合。例如,在 1#管中加入

0.5μL 的 DNA(1μg)和 0.5μL 的 siRNA(5μg),在 2#管中加入 0.55μL 的 lipofectamin(24μg)

  1. 0.45μL 不含 RNA 酶的无菌水中,将 1#管中的溶液加入 2#管中,在室温下温育 30 分钟,以形成 siRNA/DNA-lipofectamin 复合物。

 

3、制备的 siRNA/DNA-lipofectamine 复合物可用于体内导入 siRNA、DNA 或 siRNA\DNA。

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